目的研究调控Wnt5a的microrna-129-5p（mir-129-5p）抑制胆囊癌细胞增殖和转移的作用及其机制。RT-PCR检测mir-129-5p在胆囊癌细胞noz、SGC-996、GBC-SD和正常胆管上皮细胞系hibepic中的表达。用mir-129-5p-mic转染低表达mir-129-5p的胆囊癌细胞，分为对照组（NC组）和mir-129-5p过表达组（mir-129-5p-mic组）。MTT法检测各组细胞的增殖能力，Transwell法检测各组细胞的转移能力。使用Targetscan 7.1预测软件和双荧光素酶报告基因测试检测mir-129-5p对Wnt5a基因的调节作用。RT-PCR检测胆囊癌细胞noz、SGC-996、GBC-SD、NC组和mir-129-5p模拟组中wnt5amrna的表达。将胆囊癌细胞分为NC组、mir-129-5p-mic组、mir-129-5p过表达和Wnt5a敲除质粒共转染组（mir-129-5p-mic+sh-Wnt5a组）和mir-129-5p过表达和Wnt5a过表达质粒共转染组（mir-129-5p-mic+oe-Wnt5a组）。MTT法检测各组细胞的增殖能力，Transwell法检测各组细胞的转移能力。免疫印迹法检测各组中Wnt/catenin信号通路相关蛋白catenin、cyclin D1、cmyc和MMP 2的表达。结果与正常胆管上皮细胞系hibepic相比，胆囊癌细胞系中mir-129-5p的表达降低，胆囊癌细胞系GBC-SD中mir-129-5p的表达最低。与NC组相比，mir-129-5p模拟组胆囊癌细胞的增殖和转移减少。Targetscan 7.1预测软件、双荧光素酶报告基因和QRT PCR表明，mir-129-5p可以调节Wnt5a。Wnt5a在胆囊癌细胞系中的表达高于hibepic。与NC组相比，mir-129-5p模拟组、mir-129-5p模拟+sh-wnt5a组和mir-129-5p模拟+oe-wnt5a组胆囊癌细胞的增殖和转移减少，其中mir-129-5p模拟+sh-wnt5a组最低，mir-129-5p模拟+oe-wnt5a组最高。与NC组相比，mir-129-5p模拟组、mir-129-5p模拟+sh-wnt5a组和mir-129-5p模拟+oe-wnt5a组胆囊癌细胞中连环蛋白、细胞周期蛋白D1、cmyc和MMP 2的表达降低，其中mir-129-5p模拟+sh-wnt5a组最低，mir-129-5p模拟+oe-wnt5a组最高。结论mir-129-5p可调节Wnt5a的表达，抑制胆囊癌细胞的增殖和转移。